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PCR实验室防污染措施及应急处理方法

日期:2019-09-29 21:12:45 来源: CACLP体外诊断资讯 点击:

污染,是PCR实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手,PCR实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁消毒、实验习惯的核心。PCR 实验污染和细胞污染是有差别的,PCR 实验污染主要是核酸而不是细菌和其他入侵者。因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。“易查不易察”,污染来的悄无声息,我们该如何应对。今天给大家简单介绍一下PCR实验室的主要污染来源、实验中如何避免和减少污染的可能性及实验发生污染的应急处理方案。


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PCR实验室的污染来源


1、样本间交叉污染:

收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢;不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖;移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导至气溶胶形成扩散,相互交叉污染。


2、实验试剂污染:

主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。 加样过程中,因为 PCR 试剂对温度十分敏感,需要通过冰浴使得 PCR 试剂和 PCR 板/管处于 0℃,但这个过程也是充满了污染的风险的。


3、扩增产物污染:

大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖,这是 PCR 反应中最主要最常见的污染问题。因为 PCR 产物拷贝量大,远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的 PCR 产物污染,就可形成假阳性。


4、克隆质粒污染:

作为阳性质控品的克隆质粒外溢。


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PCR实验室的防污染方法

按照实验室的安全工作制度或安全标准操作程序,所有操作符合《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2008)。


1、严格执行各区功能划分:


试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。


标本制备区:核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作,应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。


扩增区:cDNA合成、DNA扩增及检测。


扩增产物分析区:扩增片段的进一步分析测定,如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。


试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品,包括移液器等器具应专用,空气、物品流向依次为:试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区,不可逆行。


2、清洁的实验用品:

实验室自配试剂(去离子水、缓冲液等)和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。